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懸浮細胞如何固定做免疫熒光等后續實驗?

更新時間:2022-10-21   點擊次數:515次

懸浮細胞呈現懸浮狀態生長,如何固定?是所有后續實驗的第一步,也是關鍵的一步,也是難倒很多人的的一步。靶點科技懸浮細胞專用固定玻片Shi-Fix,提供全新的痛點解決方案。L-多聚賴氨酸等傳統老掉牙的作坊式方法被詬病,被淘汰。

您是否希望懸浮細胞的免疫熒光像貼壁細胞一樣容易?現在就是這樣!靶點科技Shi-Fix懸浮細胞免疫熒光專用玻片直擊痛點。

細胞免疫熒光主要用于蛋白定位研究,相互作用研究和細胞信號轉導研究。細胞免疫熒光就是將免疫學方法和熒光標記技術相結合,研究特異性抗原在細胞內的分布。細胞免疫熒光特性高,敏感性強,速度快,主要原理也是利用抗原抗體反映抗原抗體結合后再用熒光標記,通過顯微鏡下觀察來確定某種特異性抗原是否存在。

根據培養的細胞類型,可分為貼壁細胞和懸浮細胞(淋巴細胞,血液的白細胞)。貼壁細胞有天然貼壁的屬性,而懸浮細胞不依賴支持物表面,在培養液中呈懸浮狀態生長。

免疫熒光實驗的基礎前提就是讓細胞能固定在玻片上。懸浮細胞如何貼壁或者固定到玻片上,是業內科研人員面對的一個難題。傳統上,或用細胞離心甩片機制備細胞片或直接涂片法制備細胞涂片,然后把細胞片于乙醇或丙酮或多聚甲醛固定。無論甩片還是涂片,都是黑盒子實驗。每個人操作手法不一樣,即使同一個人操作,每一批實驗,也都沒法評價細胞片上的細胞固定的情況,而這一步至關重要。盲目而又沒底的只能硬著頭皮往下做。浪費的不僅是時間,還有抗體等很多試劑。如何解決這些痛點?懸浮細胞免疫熒光專用玻片Shi-Fix Coverslips帶來痛點解決方案!

您是否希望懸浮細胞的免疫熒光像貼壁細胞一樣容易?現在就是這樣!

靶點科技Shi-fix玻片允許懸浮細胞分層或直接作為單層生長。簡單,無憂的實驗方案,無需離心即可將懸浮細胞固定到載玻片上。只需將細胞添加到載玻片上,等待30分鐘,用PBS洗滌未結合的細胞并繼續免疫染色(或繼續培養以獲得所需的細胞密度)。

這些玻片也可用于染色懸浮細胞以進行顯微鏡檢查,或用于固定懸浮細胞以進行共聚焦顯微鏡檢查。更重要的是,如果需要,您還可以在細胞附著在玻片上時刺激它們。您可以像貼壁細胞一樣處理非貼壁細胞!


簡單四步法固定懸浮細胞

1. 使用 PBS 清洗細胞,并將細胞重新懸浮于 PBS 中(2-5 百萬個/ml)

2. 把懸浮細胞專用免疫熒光玻片放置于12孔或者6孔細胞培養板孔里,直接滴加細胞于懸浮細胞專用免疫熒光玻片上(每個玻片上 20-30 萬個細胞)

3. 使細胞附著30分鐘,有些細胞需要延長附著時間,但不要超過1小時。使用約 2ml PBS沖洗掉未結合細胞(切勿直接垂直滴加PBS到玻片上的細胞,可將 PB滴加于板孔側邊,然后輕輕搖晃 3-5分鐘)

4. 在顯微鏡下檢查細胞附著情況,如果需要進一步培養,那么加入 1ml培養基即可;若不培養即可直接固定,染色。



懸浮細胞固定免疫熒光圖


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